目的別で選べるタンパク質発現プロトコール　発現系の選択から精製までの原理と操作

必要な量は？翻訳後修飾は？精製はどうする？可溶化が必要？そもそも発現しない！目的タンパク質を絶対に得るため，あらゆる手段をナビゲーション．実験の原理，実験操作や試薬組成の根拠までもトコトン詳しく解説．

目次

1章タンパク質の性質を知る
1 タンパク質が必要になるとき【奥脇暢／永田恭介／加藤広介／川口敦史】
１．タンパク質を解析するために
精製タンパク質の意義
タンパク質発現系の利用
タンパク質の種類
２．タンパク質を手に入れるための戦略
未知因子の精製
既知因子の精製
３．本書の特徴および概要
2 タンパク質の性質は？【加藤広介】
１．タンパク質の構造
２．タンパク質固有の性質を知る
分子量と等電点（pI）
タンパク質のドメイン構成
複合体の有無
細胞毒性
修飾の有無
細胞内局在
３．タンパク質の安定性や溶解性に影響する要因
温度
pH
塩濃度
界面活性剤
変性剤
二価金属と金属キレート試薬
プロテアーゼとプロテアーゼ阻害剤
SH 基保護剤，酸化防止剤
その他のタンパク質安定化因子
４．未知タンパク質の性質を調べる方法
５．タンパク質のデータベースや解析ツール
3 タンパク質を精製する【川口敦史／若井ちとせ】
１．精製法の選択
精製法選択の判断材料
精製法選択の考え方
２．タグの選択とタグを用いた精製の原理
金属キレートによる精製
アフィニティー精製
抗原抗体反応による精製
タグの切断
３．カラムクロマトグラフィーによる精製
各精製段階での選択肢
イオン交換クロマトグラフィー
疎水性相互作用クロマトグラフィー
ゲル濾過クロマトグラフィー
アフィニティークロマトグラフィー
４．変性と再生操作
2章タンパク質発現系の種類と原理
1 発現系の種類と特徴【内藤忠相／川口敦史】
１．各発現系で発現するタンパク質の特徴
２．各発現系の発現量の目安
発現量の調節
宿主の培養スケールの選択
３．目的に適した発現系を選択する
結合活性を知りたい場合
抗原を調製する場合
酵素活性を測定する場合
結晶化する場合
放射性標識をする場合
４．各発現系のベクターの特徴
５．コストと時間
2 大腸菌【浅賀正充】
ほか

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